Thermo Fisher（賽默飛）Countess 3 FL細(xì)胞計(jì)數(shù)儀——光立方與GFP檢測的結(jié)合

Countess 3 FL細(xì)胞計(jì)數(shù)儀與光立方概念

賽默飛的Countess 3 FL細(xì)胞計(jì)數(shù)儀是一款高度智能化、支持多通道熒光檢測的自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀。光立方（Light Cube） 是該儀器中的一個(gè)核心技術(shù)組件，用于支持多種熒光染料的高效檢測和分析。光立方內(nèi)置了激發(fā)光源和熒光濾光片，能夠針對特定熒光信號（如 GFP）進(jìn)行靈敏捕獲和分析。

• GFP（Green Fluorescent Protein，綠色熒光蛋白） 是熒光生物標(biāo)記中的分子，廣泛應(yīng)用于基因編輯、細(xì)胞轉(zhuǎn)染和標(biāo)記特定細(xì)胞亞群等實(shí)驗(yàn)。

• Countess 3 FL通過其光立方技術(shù)，可以精準(zhǔn)檢測 GFP 發(fā)出的綠色熒光信號，實(shí)現(xiàn)對 GFP 標(biāo)記細(xì)胞的高效篩選與計(jì)數(shù)。

光立方的原理與功能

光立方是Countess 3 FL儀器中負(fù)責(zé)熒光檢測的核心模塊。它包括以下兩個(gè)關(guān)鍵部件：

1. 激發(fā)光源：

• 為熒光染料提供激發(fā)能量，常使用LED作為激發(fā)光源。

• GFP的激發(fā)光波長范圍為 470 nm（藍(lán)光）。

2. 熒光濾光片：

• 用于選擇性捕捉熒光染料發(fā)射的特定波長。

• GFP的發(fā)射光波長為 510 nm（綠色光），光立方會(huì)精準(zhǔn)過濾出這一波長的熒光信號。

光立方的特點(diǎn)：

• 靈活性強(qiáng)：不同的光立方可對應(yīng)不同的熒光標(biāo)記染料（如 GFP、RFP、DAPI 等），用戶可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求進(jìn)行快速更換。

• 精確性高：每個(gè)光立方經(jīng)過嚴(yán)格校準(zhǔn)，能夠高效分辨微弱熒光信號。

• 易操作：光立方模塊的插拔設(shè)計(jì)簡單，用戶無需復(fù)雜調(diào)整即可完成更換。

GFP檢測的應(yīng)用場景

GFP作為標(biāo)記蛋白，常用于以下實(shí)驗(yàn)場景，而Countess 3 FL的光立方技術(shù)能夠提供高靈敏度的檢測支持：

1. 轉(zhuǎn)染效率評估

在基因編輯或轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中，科研人員通常會(huì)使用 GFP 作為報(bào)告基因。Countess 3 FL能夠：

• 精確計(jì)數(shù) GFP 陽性細(xì)胞的數(shù)量。

• 快速計(jì)算轉(zhuǎn)染效率（GFP 陽性細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)）。

2. 熒光標(biāo)記細(xì)胞的篩選

通過 GFP 標(biāo)記特定細(xì)胞亞群（如腫瘤細(xì)胞或免疫細(xì)胞），Countess 3 FL可快速識別 GFP 陽性細(xì)胞并輸出數(shù)量比例，為細(xì)胞分選和后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供數(shù)據(jù)支持。

3. 基因表達(dá)分析

GFP常用于監(jiān)測目標(biāo)基因的表達(dá)水平。Countess 3 FL結(jié)合其熒光檢測功能，能夠高效量化 GFP 表達(dá)的強(qiáng)度與細(xì)胞數(shù)量。

4. 細(xì)胞追蹤與動(dòng)態(tài)研究

在細(xì)胞追蹤實(shí)驗(yàn)中，GFP用于標(biāo)記細(xì)胞遷移或分化行為。Countess 3 FL的熒光模塊能夠捕捉標(biāo)記細(xì)胞的實(shí)時(shí)狀態(tài)，并提供數(shù)據(jù)分析。

Countess 3 FL的檢測流程（以GFP為例）

1. 樣本制備：

• 將含有 GFP 標(biāo)記的細(xì)胞樣本制備為懸液，濃度推薦為 1 × 10? 至 1 × 10? 個(gè)細(xì)胞/mL。

• 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，可加入臺盼藍(lán)進(jìn)行活力分析。

2. 樣本加載：

• 使用專用計(jì)數(shù)載片，取 10 µL 樣本并加載至載片中，確保樣本分布均勻。

3. 選擇檢測模式：

• 插入含 GFP 檢測功能的光立方。

• 在儀器界面選擇 GFP 通道（470/510 nm）進(jìn)行熒光檢測。

4. 結(jié)果讀取與分析：

• 儀器自動(dòng)對樣本進(jìn)行圖像捕獲和熒光分析，顯示 GFP 陽性細(xì)胞的數(shù)量和總細(xì)胞數(shù)。

• 系統(tǒng)自動(dòng)計(jì)算 GFP 陽性比例，并生成數(shù)據(jù)報(bào)告。

5. 數(shù)據(jù)存儲(chǔ)與導(dǎo)出：

• 將實(shí)驗(yàn)結(jié)果通過 USB 導(dǎo)出為 Excel 文件或高清圖像，用于后續(xù)分析或歸檔。

Countess 3 FL光立方支持的熒光染料

除了 GFP 外，Countess 3 FL還支持以下常見熒光染料：

• RFP（紅色熒光蛋白）：檢測波長范圍為 535/615 nm。

• DAPI（4',6-二脒基-2-苯基吲哚）：用于染色細(xì)胞核，檢測波長為 360/460 nm。

• mCherry：另一種紅色熒光蛋白，常用于與 GFP 組合實(shí)驗(yàn)。

科研人員可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇相應(yīng)的光立方，并靈活切換不同的熒光檢測模式。

技術(shù)優(yōu)勢總結(jié)

GFP檢測的核心優(yōu)勢：

1. 靈敏度高：光立方模塊對 GFP 熒光信號的檢測具有靈敏度，即使熒光信號較弱也能準(zhǔn)確識別。

2. 多功能性：不僅支持 GFP 標(biāo)記檢測，還可同時(shí)進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)和活力分析。

3. 高效性：檢測時(shí)間短，每個(gè)樣本僅需幾秒即可完成分析。

4. 便捷性：光立方設(shè)計(jì)可快速更換，無需復(fù)雜的硬件調(diào)整。

5. 高分辨率成像：支持高清細(xì)胞圖像捕捉，實(shí)驗(yàn)結(jié)果更直觀。

Thermo賽默飛 3FL細(xì)胞計(jì)數(shù)儀光立方應(yīng)用領(lǐng)域

1. 細(xì)胞生物學(xué)：研究細(xì)胞增殖、分化及遷移。

2. 基因編輯與轉(zhuǎn)染研究：評估轉(zhuǎn)染效率、基因表達(dá)水平。

3. 免疫學(xué)與腫瘤學(xué)：篩選 GFP 標(biāo)記的免疫細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞。

4. 藥物篩選：分析藥物對 GFP 陽性細(xì)胞的影響。

Thermo賽默飛 3FL細(xì)胞計(jì)數(shù)儀光立方總結(jié)

賽默飛Countess 3 FL細(xì)胞計(jì)數(shù)儀通過其光立方技術(shù)和多通道熒光檢測功能，為 GFP 標(biāo)記實(shí)驗(yàn)提供了高效、精確、便捷的解決方案。這款儀器不僅提升了細(xì)胞計(jì)數(shù)和熒光分析的效率，還能滿足各種復(fù)雜實(shí)驗(yàn)需求，是生命科學(xué)研究領(lǐng)域的實(shí)驗(yàn)室工具。